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厭氧培養(yǎng)箱實驗操作流程

  • 更新日期:2023-02-16      瀏覽次數(shù):1063
    • 操作室厭氧環(huán)境形成:
      1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
      2. 通電源開照明燈,開溫控儀,調(diào)節(jié)所需溫度;
      3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示紙(封閉);
      4. 關緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗;
      5. 操作室內(nèi)初次置換(氮氣置換):
      A. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊
      B. 接通氮氣進氣路,打開氮氣控制閥1,使手套鼓起,關閉閥門1,然后扎緊袋口;
      6. 操作室D二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程,取樣室先抽真空,并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續(xù)三次氮氣置換。
      7. 操作室D四次置換(混合氣體置換):
      (混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
      A. 調(diào)換氣路打開混合氣閥3進氣,充氣時取樣室先抽真空,并隨時用腳踏開關開閉排氣;
      B. 關掉混合氣體閥3,并打開閥5,使混合氣體經(jīng)過流量計,調(diào)整流量計,流量為每分鐘10ml左右;
      C. 混合氣體重復2-3次轉(zhuǎn)換,經(jīng)過上述過程,基本形成厭氧環(huán)境。
      8. 操作室內(nèi)打開粑粒除氧劑,接通除氧催化器電源進行催化除氧,一小時后打開美蘭指示紙觀察其變色狀況,不變色為操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境;
      9. 開紫外線滅菌燈,室內(nèi)進行滅菌處理,滅菌時間按具體實驗自定。
      菌種的置入和培養(yǎng):
      1. 檢查取樣室內(nèi)門并關緊;
      2. 打開取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關上外門;
      3. 取樣室充氮置換三次過程:打開真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打開氮氣閥2進氣,使指針回復零位,關掉閥2。D二次重復操作一次。D三次操作時,使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打開閥4進混合氣,使指針回復零位,關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;
      4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù);
      5. 取樣室外門開啟、關緊,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗;
      6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件:
      A. 每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示紙觀察,如不正常就重新?lián)Q氣;
      B. 要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收,保證室內(nèi)厭氧狀態(tài),補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
      C. 連續(xù)培養(yǎng)運行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
      D. 操作室內(nèi)溫度可任意選擇和控制。
      7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力0.1Mpa左右。

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